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怎樣選擇色譜柱
點擊次數:3370 發布時間:2007-01-31
 現代液相色譜中,分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬,要做合適的選擇,必須對此有一定的認識和了解。

一.硅膠基質填料:

1.正相色譜

正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其它具有極性官能團,如胺基團(NH2,APS)和氰基團(CN,CPS)的鍵合相填料。

由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其它極性基團極性較強,因此,分離的次序是依據樣品中各組份的極性大小,即極性較弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。

正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如:正己烷(Hexane)、氯仿(Chloroform)、二氯甲烷(Methylene Chloride)等。

2.反相色譜

反相色譜用的填料常是以硅膠為基質,表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強,通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。

樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組份zui先被沖洗出,而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。

常用的反相填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。

. 聚合物填料

聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等,其主要優點是在pH值為114均可使用。

相對于硅膠基質的C18填料,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。

現有的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料,色譜柱柱效較低。

三.其它無機填料

其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化。由于其特殊的性質,一般于特殊的用途。如,石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質烷基鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎,不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳可用于分離某些幾何異構體,又由于在HPLC流動相中不會被溶解, 這類柱可在任何pH與溫度下使用。 氧化鋁也可用于HPLC,氧化鋁微粒剛性強,可制成穩定的色譜柱柱床,其優點是可在pH高達12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強,應用范圍受到一定的限制,所以未能廣泛應用。新型氧化鋯基質色譜填料也可用于HPLC,商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應用pH范圍114,溫度可達100℃。由于氧化鋯填料是zui近幾年才開始研究,加之面臨的實驗難度,其重要用途與優勢尚在進行中。

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